ontrol system,the temperature control precision Can be up to 0.05℃. KEY WORDS: Immunodiagnostic,Chemiluminescence, EnzymeConjugated,Pipetting,Temperature Control,PID Algorithm. 独创性声明 本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作和取得的研究成果,除了文中特剐加以标注和致谢之处外,论文中刁i包含其他人已经发表或撰写过的研究成果,也不包含为获得叁壅盘芏或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。
与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。
学位论文作者签名:孑南)毛廊扬签字日期: 埘年十月‖11 学位论文版权使用授权书 本学位论文作者完全了解 苤鲞盘茔 有关保塑、使用学位论文的规定。
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(保密的学位论文在解密后适用本授权说明)学位论文作者签名:凇,曷 导师签名 移…签字日期:训年,月为日 签字目期:z舢夕年夕月z莎日天津大学硕士论文 第一章绪论 第一章绪论1.1引言 免疫诊断技术是现代临床检验和生命科学研究的重要手段之一。
免疫诊断学(immunodi8,gnosiS)基于抗原一抗体免疫反应原理,是诊断肿瘤、糖尿病、性腺系统疾病、甲状腺疾病等疾患的有力工具。
抗原一抗体的特异性结合反应是免疫学诊断的基础。
许多动物在受到外来抗原的刺激后便会产生相应的抗体,利用已知抗原或已知抗体可与其对应的抗体或抗原特异性结合,如果反应结果在体外可直接被观察到,如反应中有沉淀、浑浊等现象出现,便可直接用于临床抗体的检验诊断,一些早期的免疫诊断技术就以此为理论基础建立起来的。
在早期的免疫诊断技术当中,有些项目由于操作上的简便易行而仍在广泛使用,如血型鉴定、抗精子抗体检查等。
但是,大多数已被敏感性更高的标记免疫技术所代替。
由于更多的抗原一抗体的特异性结合反应人们无法直接探知,于是便出现了通过对抗原或抗体进行各种各样的标记来显示有无抗原一抗体的特异性结合反应的发生,这就是近年来被广泛使用的标记免疫检测技术,如放射免疫技术、酶标记免疫技术、荧光免疫技术等等。
通过使用标记物不但使许多原来无法直接探测到的免疫反应可被探知,而且使免疫检测技术的敏感性得到提高。
此后单克隆抗体技术的出现使抗原一抗体结合反应的特异性检测技术有了进一步大幅度提高。
近年来随着计算机技术高速发展及各种新型传感器的应用使自动化、智能化、高效率、高精度及多参数测量等成为免疫检测技术发展的方向发展。
化学发光放大技术同样利用抗原.抗体反应原理,将酶或其他非放射性标记物标记于抗原或抗体,然后与已知抗原或抗体反应,标记的酶使反应底物进行发光,经光电倍增管测量后可得到被测样本的每秒钟发光计数(CPS),再根据内置的标准曲线将CPS转换为样本的浓度值。
由于这项技术的应用,使抗原.抗体的反应时间缩短,特异性程度和灵敏度得到提高,同时辅以单克隆技术的应用,使整个反应的全自动化实现成为可能,并一改过去依赖于手工加样,再交由仪器测量的半自动化技术的局面,也是近十年来免疫检验技术的一个飞跃。
目前国内尚无自主研制的全自动免疫发光仪的成熟产品,此类仪器长期被国外公司如Beckman,Bayer, Roche以及DPC等公司垄断。
本文在参照一些国外同类仪器的基础上,设计了一套全自动化学发光系统,并对部分核心模块的功能进行了模拟实验,经在机实验证实可完全满足临床检验实验要求,同时相信对国内同类全自动免疫分析仪的开发有参考价值。
天津大学硕士论文 第一章绪论1.2免疫诊断技术的发展历程1.2.1放射免疫测定(鼬A) 由于化学发光免疫分析技术是由放射免疫技术来的,在谈到化学发光免疫技术之前,让我们首先回顾一下放射免疫测定技术的发展历程、测试方法及特点。
放射免疫测定(Radio immunoassay,RIA)是1959年Yalow和Berson首先创建的经典放射免疫分析技术,用于血清中胰岛素含量的测定,其原理框图如图1—1所示。
四十多年来,由于此项技术灵敏度高、特异性好、并已制成多种标准试剂盒,使用方便而得到了十分广泛的应用。
目前国外已成功地应用RIA检测的物质多达300余种,国内研究的被测物质也达百余种,试制的RIA试剂盒已有60余种,是测定各种微量物质不可缺少的手段。
RIA是标记抗原和未标记抗原对有限量抗体的竞争性结合或竞争性抑制反应。
在RIA反应系统中,标记抗原(Ag’)、末标记抗原(Ag)和特异性抗体(Ab)三者同时存在时,由于两种抗原具有相同的决定簇,互相竞争结合抗体的能力相同,结果形成Ag*-Ab和Ag-Ab复合物。
图1—1抗原-抗体结合反应示意图 当Ag’和Ab的量固定时,二者结合形成免疫复合物就受到Ag含量的制约。
如反应系统中Ag含量高时,对Ab的竞争结合能力就强,Ag-Ab复合物的形成量就增加,Ag’-Ab复合物则相对减少:反之,当Ag含量低时,对Ab的竞争结合能力弱,Ag+-Ab复合物的形成量即增多。
因此,Ag+一Ab复合物的形成量与Ag含量之间呈一定的负相关函数关系。
天津大学硕士论文 第章绪论 RIA的优点: ·成本底、灵敏度高; ·不受周围环境和样本干扰物质的影响: · 与小颗粒同位素的结合不影响免疫反应和; 具有完善的放射测量体系; · -但其缺点也是显而易见的: 同位素的半衰期使货架期短,试剂盒不易储存; · ·反应时间过长,并且反应时间不…,不易实现自动化; 结合于抗原或抗体分子上的1125碘分子数量有限,过高会引起结合物的 ·自照射雨分解,影确试裁的使弼;购买以及废物处理等均引起一定的辐射安全问题,虽然RIA涉及的放射性较小,但仍会面临公众的反核的负面的影响;同时,临床医学要求快速诊断的呼声不断增高,使RIA面临进一步挑战。
1.2.2化学发光技术的建立l、化学发光技术的定义 化学发光技术是近十几年来发展起来的一种测定方式,利用化学反应释放的自由能激发中间体(常用碱性磷酸酶一金刚烷胺),使其从激发态回到基态,当中间体从激发态回到基态时会释放等能级的光子,通过对光子进行测定而进行定量分析。
化学发光具有荧光的特异性,同时不需要激发光,从而避免了荧光分析中激发光杂数光的影响,有很高的灵敏度:并且不象放射分析那样存在强烈的环境污染和健康危害,是一种非常优秀的定量分析方法。
2、化学发光免疫技术的前身 化学发光免疫技术的前身可以称为酶免疫分析技术,酶作为催化特异反应的一种生物蛋白,由于其催化作用,使反应物得以高度转换,具有很大的放大效应。
酶探测频率颇高,平均~个酶分子一秒内产生一千分子的有色荧光或发光物质。
1 966年Avrameas和Uriel首先将酶偶联应用于抗原和抗体;随后在1974年,Syvaco首先报道了EIA分析,即均相“酶测免疫分析”(EnzymeMonitored Immunoassay),开创了酶免疫分析的临床应用。
虽然酶免疫技术不是真正的化学发光技术,但其为化学发光技术的应用奠定了良好基础。
3、化学发光技术的应用 1978年Schrpeder在RIA和EIA基本理
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